SP3 样品前处理

一号

SP3（Single-Pot Solid-Phase-enhanced Sample Preparation）是一种流行的蛋白质组学样品制备策略[10.15252/msb.20145625]。

原理：利用羧基磁珠（carboxylate-coated beads）在高有机溶剂环境下吸附蛋白；完成清洗、还原、烷基化、酶解。SP3 protocol 在单管中进行，使用亲水性顺磁性珠子，能够无偏倚和可逆地在亲水作用色谱（HILIC）模式下固定蛋白质和肽段。然后可以在磁力架上高效地清理捕获的蛋白质和肽段，即使在高达10%的SDS或8 M尿素存在下也是如此。由于HILIC模式对分析物的保留相对较弱，特别是在高浓度缓冲盐存在的情况下，这种保留性能出奇地好[10.1007/s00216-008-1865-7]。清理后，捕获的蛋白质和肽段可以直接使用水溶液从珠子上洗脱。洗脱的蛋白质随后通常在5 mL酶解缓冲液中过夜被胰蛋白酶酶解[10.1038/s41596-018-0082-x]。

由于简便易用，SP3方法已在从基础生物学到临床应用的不同领域的各种生物学研究中得到了很好的应用。